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串聯層析

夏志豪2年前16瀏覽0評論

串聯層析?

串聯親和純化(TAP/MS)是免疫共沉淀(Co-IP/MS)的“近親”,兩者在尋找誘餌蛋白的互作蛋白以及純化互作蛋白的原理方面非常相似。但是TAP/MS經過2步親和純化,而Co-IP/MS只有1步親和純化,故而TAP/MS可以有效減少非特異蛋白的結合。

基本流程:構建含有目的基因的載體,使目的基因與2個不同的表位標簽融合表達,如Flag、HA、His、CBP、SBP等等。采用Flag-HA雙標簽載體;載體轉染細胞并表達融合蛋白“Flag-HA-誘餌蛋白”;細胞裂解提取總蛋白,經anti-flag樹脂和anti-HA樹脂的兩步純化和洗脫,更大限度了去除了假陽性蛋白。洗脫液進入質譜儀,分析鑒定與誘餌蛋白具有相互作用的蛋白。